¿Qué es la electroforesis?

La electroforesis es la migración de proteínas, moléculas u otras partículas cargadas eléctricamente, disueltas o suspendidas en un electrolito a través del cual se pasa una corriente eléctrica.

Precauciones en la electroforesis

Los voltajes utilizados en electroforesis pueden proporcionar descargas eléctricas letales. El peligro se incrementa por el uso de soluciones acuosas reguladoras y la posibilidad de trabajar en ambientes húmedos.

A excepción de la fuente de poder, el equipo debe estar dentro de una caja metálica o en una caja de material aislante. La caja debe tener un aditamento que permita apagar la fuente de poder en caso de ser abierta.

Los cables de alto voltaje que unen la fuente de poder y el aparato deben ser de metal trenzado y protegido. Cubierto completamente la parte central aislada del conductor el cual debe estar aterrizado.

La base del aparato debe estar conectada a tierra de tal forma que cualquier escape de la solución electrolitos produzca un corto que desactive la fuente de energía.

Debido a los peligros potenciales asociados a la electroforesis, el personal del laboratorio que maneje esta técnica debe estar completamente familiarizado con el equipo y el proceso antes de aplicarlo.

Equipos para electroforesis

El aparato para electroforesis consiste de:

Fuente de poder adecuada que administre una corriente constante directa y aditamentos para indicar y controlar tanto el voltaje de suministro como el consumo de corriente, se puede adicionar un circuito que estabilice la salida de corriente (regulador de voltaje).

Ensamble electroforético con aditamentos especiales para soportar las placas electroforéticas. Para las electroforesis donde se utilice papel, gel de agar, gel de agarosa-almidón o acetato de celulosa como soporte electroforético, el ensamble consiste en un tanque con tapa de vidrio o de algún otro material que permita el cerrado hermético. El tanque contiene aditamentos de seguridad los cuales desconectan la fuente de energía cuando la tapa se quita, además dos dobles canales en cada extremo provistos de una parte divisoria central.

A lo largo del fondo de los compartimentos de cada doble canal se encuentra un electrodo de platino conectado por medio de cables aislados y sellados a las paredes del tanque, al cable externo conectado a la fuente de poder.

Los canales se llenan con la suficiente cantidad del  electrolito especificado en la monografía, para asegurar la inmersión completa de los electrodos.

El contacto entre el compartimiento interno y el externo de cada doble canal puede ser por medio de un puente  de papel electroforético o bien mediante pequeñas perforaciones de la parte central divisoria.

Para electroforesis en gel de agar y en gel de agarosa-almidón el tanque está diseñado para permitir cierta ventilación y evitar la condensación de la humedad o que la capa del medio sólido se seque.

Para electroforesis en gel de poliacrilamida el ensamble consiste en dos recipientes de polimetilmetacrilato para la solución reguladora, conteniendo cada uno un electrodo de platino. El recipiente superior está montado arriba verticalmente del inferior y su altura es ajustable. En su base, tiene una serie de soportes de hule equidistantes del electrodo.

Soporte electroforético

Para electroforesis en papel y en acetato de celulosa, el soporte electroforético es en forma de tiras sostenidas entre los canales sobre una superficie uniforme compuesta de puntos de contacto de plástico inerte o vidrio, espaciados para minimizar la difusión capilar de la solución de electrolitos.

Para electroforesis en gel de agar y de agarosa-almidón, el soporte electroforético es en forma de capa de gel de 6mm de grosor sobre una placa de vidrio la cual, se coloca sobre una placa cóncava metálica a través de la cual puede ser circulado un líquido congelante y la superficie superior de la cual esta sujeta para permitir un contacto íntimo con la placa de vidrio.

El soporte electroforético se conecta tanto directamente como indirectamente por medio de mechas de un material adecuado, al compartimiento de cada doble canal donde no contiene el electrodo.

Para electroforesis en gel de poliacrilamida, el soporte electroforético es en forma de gel contenido en tubos de vidrio limpios de 7.5 cm de longitud y 0.5cm de diámetro interno.

Dado que en la electroforesis es crucial el buen funcionamiento de la cámara electroforética, tanto para prevención de accidentes como para la separación adecuada de los analitos, es importante que la cámara sea verificada al menos dos veces al año, ICLAB cuenta con ingenieros de servicio capacitados para tal efecto.

Instrumentos Científicos y de Laboratorio (ICLAB) es una empresa dedicada a la calibración de instrumentos de medición tales como: espectrofotómetros, potenciómetros,  viscosímetros, balanzas, básculas, manómetros, entre otros.

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Los electrodos de pH

Para medir el pH, se utilizan dos tipos de electrodos y cada uno de ellos tiene un propósito específico. El electrodo “de cristal” tiene un bulbo hecho de composición de cristal especial que es muy selectivo y sensible a los iones de hidrógeno. Cuando este bulbo de cristal se sumerge en una solución, el voltaje generado en la superficie de los bulbos se relaciona con el pH de la solución.

El otro electrodo se llama “electrodo de referencia” y proporciona un voltaje estable y reproducible cuando se sumerge en una solución. Cuando los dos electrodos están conectados con un medidor de pH, la diferencia de voltaje se amplifica y se visualiza en un indicador analógico o digital. Un electrodo que combine el bulbo de cristal sensible al pH y una celda de la referencia en un cuerpo de electrodo se llama “electrodo de combinación” y se utiliza de la misma manera que un par del electrodos.

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